Амплисенс hcv fl

Амплисенс hcv fl

Переезд склада в Европу.
Реализуем препараты от гепатита С в России по закупочной цене - ликвидация склада
Перейти на сайт

Транскрипт

1 ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для выявления 16S РНК патогенных геновидов лептоспир в клиническом, аутопсийном и биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационнофлуоресцентной детекцией «АмплиСенс Leptospira-FL» АмплиСенс ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Российская Федерация, , город Москва, улица Новогиреевская, дом 3а Только для исследовательских и иных немедицинских целей

2 ФОРМА КОМПЛЕКТАЦИИ Набор реагентов выпускается в 4 формах комплектации: Форма 1 включает комплект реагентов «РИБО-преп» вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант FRT. Форма 2 включает комплекты реагентов «РИБО-золь-С» вариант 50, «РИБО-сорб» вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант FRT. Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT. Форма 4 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке. ВНИМАНИЕ! Заявленные аналитические характеристики набора реагентов при работе с формой 3 гарантируются только в случае применения дополнительных комплектов реагентов «РИБО-сорб» и «РИБО-золь-С» или «РИБО-преп» производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Форма комплектации 4 предназначена для производственных целей для последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам. ВНИМАНИЕ! Использование формы комплектации 4 производится только в соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. СОСТАВ Комплект реагентов «РИБО-преп» вариант 50 комплект реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала включает: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Раствор для лизиса флакон Раствор для преципитации 20 1 флакон Раствор для отмывки 3 22,5 1 флакон Раствор для отмывки флакон РНК-буфер 1,2 4 пробирки Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК из 50 проб, включая контроли. 1 При хранении раствора для лизиса, лизирующего раствора и раствора для отмывки 1 при температуре от 2 до 8 С возможно образование осадка в виде кристаллов. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 2 из 24

3 Комплект реагентов «РИБО-золь-С» вариант 50 комплект реагентов для первого этапа выделения РНК из биологического материала включает: Раствор А Раствор В Раствор D Раствор Е Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Прозрачная оранжевого цвета 15 1 флакон 5,0 1 флакон 20 1 флакон 1,5 1 пробирка Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК из 50 проб, включая контроли. Комплект реагентов «РИБО-сорб» вариант 50 (ТУ ) комплект реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала включает: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во Лизирующий раствор 1 22,5 1 флакон Раствор для отмывки флакон Раствор для отмывки флакон Раствор для отмывки флакон Сорбент Суспензия белого цвета 1,25 1 пробирка РНК-буфер Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК из 50 проб, включая контроли. 0,5 5 пробирок Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT комплект реагентов для проведения реакции обратной транскрипции 16S РНК и ПЦР-амплификации кднк патогенных геновидов лептоспир с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» включает: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во RT-G-mix-2 0,01 2 пробирки ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT Leptospira 0,6 1 пробирка ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT 0,3 1 пробирка Полимераза (TaqF) 0,03 1 пробирка ТМ-Ревертаза (MMlv) 0,015 1 пробирка Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 3 из 24

4 Реактив Описание Объем (мл) Кол-во ПКО кднк Leptospira 0,1 1 пробирка РНК-элюент 0,07 2 пробирки Комплект реагентов рассчитан на проведение 60 реакций обратной транскрипции и амплификации, включая контроли и калибраторы. Дополнительно к комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа выделения: Реактив Описание Объем (мл) Кол-во ОКО 1,6 2 пробирки ПКО Leptospira-rec 0,03 5 пробирок ВКО STI-87-rec 0,12 5 пробирок НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «АмплиСенс Leptospira-FL» предназначен для выявления 16S РНК патогенных геновидов лептоспир в клиническом (кровь, спинномозговая ), аутопсийном (ткани мозга, почек, печени, мезентериальные лимфоузлы, ткани легких), полевом материале и материале от павших животных (ткани мозга, легких, почек животных), животных с острой формой инфекции (кровь) и при персистенции лептоспир в почках (моча) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. Формы комплектации 1 и 2 предназначены для полного анализа, включая выделение РНК из клинического материала, проведение реакции обратной транскрипции РНК и ПЦРамплификации кднк с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Форма комплектации 3 предназначена для проведения реакции обратной транскрипции РНК и ПЦР-амплификации кднк с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Для полного анализа необходимо дополнительно использовать комплект реагентов «РИБО-сорб» и «РИБО-золь-С» или «РИБО-преп» для выделения РНК из клинического материала производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 4 из 24

5 ВЗЯТИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ПРОБ Для проведения анализа используется следующий материал. Материал от людей: клинический материал (кровь, спинномозговая ); аутопсийный материал (ткани мозга, почек, печени, мезентериальные лимфоузлы, ткани легких). Материал от животных (биологический материал): моча; кровь; ткани мозга, легких, почек. Хранить материал в течение 1 сут при температуре от 2 до 8 С. Секционный материал хранить 1 нед при температуре не выше минус 16 С, длительно при температуре не выше минус 68 С. Предварительная обработка материала Кровь и СМЖ. Взятие цельной периферической крови проводится утром натощак в пробирку с 6 % раствором ЭДТА из расчета 1:20. Закрытую пробирку с цельной периферической кровью несколько раз переворачивают. Для отбора плазмы пробирку с кровью центрифугируют в течение 10 мин при 1000 g (если кровь стояла при температуре от 2 до 8 С более 1 ч после ее забора, то пробирку следует аккуратно несколько раз перевернуть для равномерного перемешивания крови). Затем отбирают две пробирки по 1 мл плазмы и центрифугируют ее при 13 тыс об/мин в течение 10 мин для концентрирования бактериальных клеток. После этого 900 мкл надосадочной плазмы удаляют наконечником с фильтром в емкость с дезинфицирующим раствором, а осадок и 100 мкл надосадка исследуются на наличие 16S РНК лептоспир. Аналогичным образом приготовленный второй осадок хранится при температуре не выше минус 16 С для повторного выделения в случае нарушения какоголибо из технологических процессов. Допускается хранение только осадка плазмы при температуре не выше минус 16 С в течение 1 нед, длительное хранение при температуре не выше минус 68 С. При исследовании СМЖ также формируется осадок при 13 тыс об/мин в течение 10 мин и исследуются осадок и 100 мкл надосадочной жидкости. Моча. Для исследования моча собирается в стерильную посуду. Если нет возможности Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 5 из 24

6 исследовать материал в течение 24 ч после забора, моча переносится в центрифужную пробирку на 30 мл или «Эппендорф», затем в нее вносят глицерин, 10 % от объема пробы, перемешивают для равномерного распределения глицерина и замораживают при температуре не выше минус 16 С для хранения в течение 1 нед или при температуре не выше минус 68 С в течение более длительного времени. При наличии центрифуги с охлаждением до 4 С для пробирок объемом 30 мл и ускорением 9-10 тыс g используется следующий алгоритм пробоподготовки. Пробу центрифугируют при 9-10 тыс g в течение 10 мин, затем надосадок переносят в емкость с дезинфицирующим раствором, оставив в пробирке осадок и 1 мл надосадка, после чего осадок ресуспендируют в оставшемся 1 мл надосадка и переносят в отдельную пробирку. После чего снова концентрируют пробу при 13 тыс об/мин в течение 10 мин. 900 мкл надосадка переносят в емкость с дезинфицирующим раствором, а осадок и 100 мкл надосадка используют для выделения РНК. В случае наличия большого количества солей или слизи для выделения РНК в отдельную пробирку переносят 100 мкл надосадка и верхний слой клеток, аккуратно снятый с осадка солей. При отсутствии центрифуги для пробирок объемом 30 мл и ускорением 9-10 тыс g проводят концентрирование бактерий только из 1 мл мочи как описано выше, используя пробирки на 1,5 мл и микроцентрифугу для пробирок типа «Эппендорф». Остальной объем мочи обеззараживают в дезрастворе. Внутренние органы животных и аутопсийный материал гомогенизируют с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков, затем готовят 10 % суспензию на стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере. Для выделения РНК берут 30 мкл суспензии. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно-биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемиологических правил СП «Безопасность работы с микроорганизмами III IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН «Санитарноэпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и методических указаний МУ «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I IV групп патогенности». При работе необходимо всегда выполнять следующие требования: — Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 6 из 24

7 хранение в соответствии с СП «Безопасность работы с микроорганизмами III IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». — Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя дезинфицирующие средства в соответствии с СП «Безопасность работы с микроорганизмами III IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». — Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Экстракции, продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы, оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия процесса. — Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также использованные реагенты, упаковку 2, биологический материал, включая материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом, следует удалять в соответствии с требованиями СанПиН «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов. — Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для автоматических дозаторов с фильтром 3. Одноразовую пластиковую посуду (пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззараживания медицинских отходов. — Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после завершения работ необходимо подвергать ультрафиолетовому облучению в течение 30 мин. — Набор реагентов предназначен для одноразового применения для проведения ПЦРисследования указанного количества проб (см. раздел «Состав»). — Набор реагентов готов к применению согласно данной инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению. — К работе с набором реагентов допускается только персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории в 2 Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г. 3 Для удаления надосадочной жидкости в процессе экстракции с помощью вакуумного отсасывателя используются одноразовые наконечники без фильтра. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 7 из 24

8 установленном порядке (СП «Безопасность работы с микроорганизмами III IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней»). — Не использовать набор реагентов, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид реагента не соответствует описанию. — Не использовать набор реагентов, если не соблюдались условия транспортирования и хранения согласно инструкции. — Не использовать набор реагентов по истечении срока годности. — Использовать одноразовые неопудренные перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по окончании работы. Все операции проводятся только в перчатках для исключения контакта с организмом человека. — Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и слизистой оболочкой. Вреден при проглатывании. При контакте немедленно промыть пораженное место водой, при необходимости обратиться за медицинской помощью. — Листы безопасности реагентов (SDS safety data sheet) доступны по запросу. Оценка вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти отрицательные последствия для организма человека (для форм комплектации, не включающих комплекты реагентов «РИБО-преп», «РИБО-золь-С», «РИБО-сорб»). При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер предосторожности набор безопасен. Оценка вероятных событий, в результате наступления которых могут произойти отрицательные последствия для организма человека (для форм комплектации, включающих комплекты реагентов «РИБО-преп», «РИБО-золь-С», «РИБО-сорб»). При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер предосторожности контакт с организмом человека исключен. При аварийных ситуациях возможно следующее: — раздражение слизистой оболочки глаз у чувствительных лиц, — раздражение кожи у чувствительных лиц, — аллергическая реакция, — вред при вдыхании, — вред при приеме внутрь. Специфические воздействия комплекта реагентов на организм человека (для всех форм комплектации): — Канцерогенный эффект отсутствует. — Мутагенное действие отсутствует. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 8 из 24

9 — Репродуктивная токсичность отсутствует. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ, ТРЕБУЕМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА (с указанием фирм-производителей / поставщиков): ЗОНА 1. Для выделения РНК из проб требуются: 1. Ламинарный бокс (например, «БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2», «Ламинарные системы», Россия, класс биологической безопасности II тип А). 2. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 С (например, «ТЕРМО 24-15», «Биоком», Россия). 3. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия). 4. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 16 тыс g (например, MiniSpin, Eppendorf, Германия). 5. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия). 6. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия). 7. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки на 1,5 мл (например, Axygen, США). 8. Штативы для пробирок на 1,5 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия) и наконечников (например, Axygen, США). 9. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с фильтром до 200 мкл и до 1000 мкл (например, Axygen, США). 10. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл (например, Axygen, США). 11. Холодильник от 2 до 8 С с морозильной камерой от минус 24 до минус 16 С. 12. Отдельный халат и одноразовые перчатки. 13. Емкость с дезинфицирующим раствором. ЗОНА 2. Для реакций обратной транскрипции и ПЦР-амплификации, а также гибридизационнофлуоресцентной детекции продуктов ПЦР-амплификации требуются: 1. Амплификатор, например, Rotor-Gene 3000/6000 (Corbett Research, Австралия); iq5 (Bio- Rad, США) или эквивалентный. 2. ПЦР-бокс (например, «БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», «Ламинарные системы», Россия). 3. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия). Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 9 из 24

10 4. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия). 5. Одноразовые полипропиленовые пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл (например, Axygen, США). 6. Одноразовые наконечники с фильтром до 200 мкл (например, Axygen, США). 7. Штативы для наконечников (например, Axygen, США) и пробирок объемом 0,2 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия). 8. Холодильник от 2 до 8 С. 9. Отдельный халат и одноразовые перчатки. 10. Емкость с дезинфицирующим раствором. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-АНАЛИЗА ЭТАП 1. ВЫДЕЛЕНИЕ РНК ИЗ ПРОБ (проводится в ЗОНЕ 1 помещении для обработки исследуемого материала). А. Выделение РНК при помощи комплекта реагентов «РИБО-преп». 1. Раствор для лизиса (если он хранился при температуре от 2 до 8 С) прогреть при температуре 65 С до полного растворения кристаллов. 2. В случае выделения РНК из гомогенатов тканей отобрать необходимое количество одноразовых пробирок на 1,5 мл с плотно закрывающимися крышками (включая отрицательный и положительный контроли выделения). Внести в каждую пробирку по 10 мкл ВКО STI-87-rec. Добавить в пробирки по 300 мкл раствора для лизиса. Промаркировать пробирки. 3. В пробирки с раствором для лизиса и ВКО STI-87-rec внести по 50 мкл исследуемых суспензий. 4. При выделении из осадков клеток после концентрирования лептоспир непосредственно в исследуемые пробирки с осадками необходимо внести 300 мкл раствора для лизиса и 10 мкл ВКО STI-87-rec. В пробирку отрицательного контроля (ОК) выделения вносят только 10 мкл ВКО STI- 87-rec и 300 мкл раствора для лизиса. В пробирку положительного контроля (ПК) внести 300 мкл раствора для лизиса, затем добавить 90 мкл ОКО, 10 мкл ВКО STI-87- rec и 10 мкл ПКО Leptospira-rec. 5. Содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе и прогреть 5 мин при 65 С в термостате. 6. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для преципитации, перемешать на вортексе. 7. Процентрифугировать пробирки на микроцентрифуге в течение 5 мин при 13 тыс об/мин. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 10 из 24

11 8. Аккуратно отобрать надосадочную, не задевая осадок, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 9. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3, плотно закрыть крышки, осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз. Можно провести процедуру одновременно для всех пробирок, для этого необходимо накрыть пробирки в штативе сверху крышкой или другим штативом, прижать их и переворачивать штатив. 10. Процентрифугировать при 13 тыс об/мин в течение 2 мин на микроцентрифуге. 11. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 12. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4, плотно закрыть крышки и осторожно промыть осадок, переворачивая пробирки 3-5 раз. 13. Процентрифугировать при 13 тыс об/мин в течение 2 мин на микроцентрифуге. 14. Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 15. Поместить пробирки в термостат при температуре 65 С на 2 мин для подсушивания осадка (при этом крышки пробирок должны быть открыты). 16. Добавить в пробирки по 40 мкл РНК-буфера. Перемешать на вортексе. Поместить в термостат при температуре 65 С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе. 17. Процентрифугировать пробирки при 13 тыс об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная содержит очищенные РНК и ДНК. Пробы готовы к постановке реакции обратной транскрипции и ПЦР. Б. Выделение РНК при помощи комплектов реагентов «РИБО-золь-С» и «РИБО-сорб». I этап. 1. В пробирки с исследуемыми осадками крови, СМЖ (при выделении из СМЖ после лизиса в пробирку добавляется 50 мкл ОКО) или мочи или с тканевым гомогенатом внести по 300 мкл раствора D, затем добавить 10 мкл ВКО STI-87-rec. В пробирку отрицательного контроля (ОК) выделения внести 300 мкл раствора D, затем добавить 10 мкл ВКО STI-87-rec и 100 мкл ОКО. В пробирку положительного контроля (ПК) выделения внести 300 мкл раствора D, затем добавить 90 мкл ОКО, 10 мкл ВКО STI- 87-rec и 10 мкл ПКО Leptospira-rec. После чего пробы тщательно перемешать на вортексе и прогреть при температуре 56 С в течение 5 мин, несколько раз перемешивая. После этого пробы необходимо центрифугировать в течение 5 с на вортексе для удаления капель с внутренней поверхности крышки пробирки. В случае исследования суспензий тканей органов можно на первом этапе в пустые пробирки внести 300 мкл раствора D, 10 мкл ВКО STI-87-rec и затем по 30 мкл исследуемой пробы. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 11 из 24

12 2. Добавить к образцам, лизированным в растворе D, 30 мкл раствора Е, перемешать на вортексе и центрифугировать 5 с при 13 тыс об/мин для удаления капель с внутренней поверхности крышки пробирки. 3. В пробирки добавить 300 мкл раствора А, перемешать на вортексе и центрифугировать 5 с при 13 тыс об/мин для удаления капель с внутренней поверхности крышки пробирки. 4. В пробирки добавить 100 мкл раствора В, перемешать на вортексе в течение 1-2 мин (раствор должен стать молочно-белым), затем поместить пробы на ледяную баню (при температуре от 0 до 4 С) на 10 мин. После этого центрифугировать пробирки в течение 10 мин при 10 тыс g. 5. В новые пробирки объемом 1,5 мл внести по 400 мкл лизирующего раствора и промаркировать соответственно номерам проб. 6. После центрифугирования раствор должен разделиться на 2 фазы: нижнюю (фенольную), содержащую белки и ДНК, и верхнюю (водную), содержащую РНК. Необходимо аккуратно отобрать верхнюю фазу (400 мкл при выделении РНК из ликвора, осадков мочи и гомогенатов внутренних органов, 200 мкл из осадков крови, 450 мкл при выделении РНК из ОКО и ПКО), не захватывая нижний слой, и перенести ее в пробирку с лизирующим раствором. Тщательно перемешать смесь. II этап. 7. Тщательно ресуспендировать сорбент на вортексе. В каждую пробирку отдельным наконечником добавить по 25 мкл сорбента. Перемешать на вортексе, поставить в штатив на 1 мин, еще раз перемешать и оставить на 5 мин. 8. Центрифугировать пробирки для осаждения сорбента при 10 тыс g в течение 30 с на микроцентрифуге. Удалить надосадочную, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 9. Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 1. Перемешать на вортексе до полного ресуспендирования сорбента, процентрифугировать 30 с при 10 тыс g на микроцентрифуге. Удалить надосадочную, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 10. Добавить в пробирки по 500 мкл раствора для отмывки 3. Тщательно ресуспендировать сорбент на вортексе. Процентрифугировать 45 с при 10 тыс g на микроцентрифуге. Удалить надосадочную, используя вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для каждой пробы. 11. Повторить отмывку раствором для отмывки 3, следуя пункту Добавить в пробирки по 400 мкл раствора для отмывки 4. Тщательно ресуспендировать сорбент на вортексе, процентрифугировать 1 мин при 10 тыс g на микроцентрифуге. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 12 из 24

13 Полностью удалить надосадочную из каждой пробирки отдельным наконечником, используя вакуумный отсасыватель. 13. Поместить пробирки в термостат при температуре 56 С на 10 мин для подсушивания сорбента. При этом крышки пробирок должны быть открыты. 14. В пробирки добавить по 40 мкл РНК-буфера, используя свободный от РНКаз наконечник с фильтром. Перемешать содержимое пробирок на вортексе. Поместить в термостат при температуре 56 С на 5 мин (встряхивая пробы на вортексе каждую минуту). Перемешать на вортексе и процентрифугировать пробирки на максимальных оборотах микроцентрифуги (16 тыс g) в течение 1 мин. Надосадочная содержит очищенную РНК. Пробы готовы к постановке реакции обратной транскрипции и ПЦР. ЭТАП 2. ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ, ПЦР- АМПЛИФИКАЦИИ И ДЕТЕКЦИИ ПРОДУКТОВ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ (проводится в ЗОНЕ-2 помещении для проведения ПЦР-амплификации). Общий объем реакции 25 мкл, объем РНК-пробы 10 мкл. ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку «Rnase-free», «Dnase-free». Порядок работы: А. Подготовка пробирок для проведения ПЦР. 1. Поставить в штатив необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. Тип пробирок зависит от используемого прибора. Для N исследуемых образцов, с учетом отрицательного и положительного контролей прохождения реакции амплификации ДНК необходимо взять (N+2) пробирок. 2. Приготовить реакционную смесь на необходимое количество реакций смешать в отдельной пробирке ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT Leptospira, ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT, полимеразу (TaqF), TM-Ревертазу (MMlv) и RT-G-mix-2 из расчета на каждую реакцию: 10 мкл ОТ-ПЦР-смеси-1-FRT Leptospira 5 мкл ОТ-ПЦР-смеси-2-FEP/FRT 0,5 мкл полимеразы (TaqF) 0,25 мкл TM-Ревертазы (MMlv) 0,25 мкл RT-G-mix-2 3. Внести в пробирки по 15 мкл готовой реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной смеси выбросить. 4. Используя наконечник с фильтром, добавить 10 мкл РНК-пробы в пробирку с Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 13 из 24

14 реакционной смесью. Осторожно перемешать пипетированием. (При добавлении РНКпроб необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь для ОТ-ПЦР). 5. Поставить контрольные реакции амплификации. а) отрицательный контроль (К-) внести в пробирку 10 мкл РНК-элюента. б) положительный контроль (К+) внести в пробирку 10 мкл ПКО кднк Leptospira. ВНИМАНИЕ! Пробы амплифицировать сразу после соединения реакционной смеси, РНК-пробы и контролей! Время внесения проб в реакционную смесь и запуска реакции на приборе не должно превышать мин. Б. Проведение амплификации. 1. Запрограммируйте прибор для выполнения соответствующей программы амплификации и детекции флуоресцентного сигнала согласно описанию для данного прибора (см. приложения к инструкции для используемого прибора). 2. Анализ результатов осуществляется автоматически в программном обеспечении, соответствующем используемому оборудованию. Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации ДНК. СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ Срок годности. См. на этикетке. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное. Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 С не более 5 сут. При получении разукомплектовать в соответствии с указанными температурами хранения. Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное. Хранение. Комплект реагентов «РИБО-золь-С», «РИБО-сорб», «РИБО-преп», «ПЦРкомплект» (кроме RT-G-mix-2, ОТ-ПЦР-смеси-1-FRT Leptospira, ОТ-ПЦР-смеси-2-FEP/FRT, полимеразы (TaqF) и ТМ-Ревертазы (MMlv)) хранить при температуре от 2 до 8 С. RT-Gmix-2, ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT Leptospira, ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT, полимеразу (TaqF) и ТМ-Ревертазу (MMlv) хранить при температуре от минус 24 С до минус 16 С. ОТ-ПЦРсмесь-1-FRT Leptospira хранить в защищенном от света месте. Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу , г.москва, ул. Новогиреевская, дом 3А, Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету потребителя на сайте: Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 14 из 24

15 Приложение 1 ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ АМПЛИФИКАЦИИ, АНАЛИЗ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРИ ПОМОЩИ ПРИБОРОВ ROTOR-GENE 3000/6000 (Corbett Research, Австралия) Для работы с прибором Rotor-Gene 3000 следует использовать программу «Rotor-Gene» версии 6, с прибором Rotor-Gene 6000 программу Rotor-Gene 6000 версии 1.7 (build 67) или выше. Далее по тексту термины, соответствующие разным версиям приборов и программного обеспечения указаны в следующем порядке: для прибора Rotor-Gene 3000 / для англоязычной версии программы Rotor-Gene 6000 / для русскоязычной версии программы Rotor-Gene Программирование амплификатора. 1. Включить прибор и запустить программу «Rotor-Gene 6». 2. Установить пробирки в карусель амплификатора Rotor-Gene 3000/6000 (ячейки карусели пронумерованы, эти номера используются в дальнейшем для программирования положения проб в амплификаторе). Запрограммировать прибор. ВНИМАНИЕ! Лунка 1 обязательно должна быть заполнена какой-либо исследуемой пробиркой. 3. Задать программу амплификации (см. табл. 1). Таблица 1 Программа амплификации кднк Leptospira Этап Температура Продолжительность Измерение Количество этапа флуоресценции циклов 1 50 С 30 мин С 15 мин 1 95 С 20 c 3 65 С 50 c С 20 c 95 С 20 c FAM/Green, 4 61 С 50 с 38 JOE/Yellow 72 С 20 с 4. Задать параметры калибрования (активировать «Calibrate»/«Gain Optimisation»/«Опт.уровня сигн.» в мастере нового эксперимента): осуществлять измерение флуоресценции по каналам FAM/Green, JOE/Yellow (активировать «Calibrate Acquiring»/«Optimise Acquiring»/«Опт. Детек-мых»); осуществлять калибрование по каналам FAM/Green, JOE/Yellow перед первым измерением (активировать («Perform Calibration Before 1 st Acquisition»/«Perform Optimisation Before 1 st Acquisition»/«Выполнить оптимизацию при 1-м шаге детекции»); установить калибровки канала FAM/Green по первой пробирке и от 3Fl до 7Fl, канала JOE/Yellow от 10 Fl до 20Fl (активировать «Edit»/«Правка», окно «Auto gain calibration channel settings»/«авто-оптимизация уровня сигнала»). 5. Запустить программу амплификации, активировав «Start Run»/«Старт», и присвоить название эксперимента. 6. В процессе работы амплификатора или по окончании его работы необходимо запрограммировать положение исследуемых образцов, положительного и отрицательного контролей выделения, положительного и отрицательного контролей прохождения реакции обратной транскрипции РНК и амплификации кднк. Для этого необходимо внести данные в таблицу образцов (открывается автоматически после запуска амплификации). В колонке «Name»/«Имя» указать названия/номера исследуемых Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 15 из 24

16 образцов. Положительный контроль ОТ-ПЦР обозначить как «К+», отрицательный как «К-». Напротив всех исследуемых образцов установить тип «Unknown»/«Образец», положительных контролей тип «Positive control»/«положительный контроль», для отрицательного контроля выделения тип «Negative control»/«отрицательный контроль», отрицательного контроля ОТ- ПЦР тип «NTC»/«ОТР. (ПФ)». Для ячеек, соответствующих пустым пробиркам, установить тип «None»/«Пусто». АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ Анализ результатов амплификации Leptospira (канал JOE): 1. Активировать нажатием в меню кнопки «Analysis»/«Анализ», выбрать режим анализа «Quantitation»/«Количественный», активировать кнопку «Cycling A. JOE»/«Cycling A. Yellow», «Show»/«Показать». 2. Отменить автоматический выбор уровня пороговой линии Threshold/Порог. 3. В меню основного окна (Quantitation analysis/количественный анализ) должны быть активированы кнопки «Dynamic tube»/«динамич.фон» и «Slope Correct»/«Коррект.уклона». 4. В меню «CT Calculation»/«Вычисление CT» (в правой части окна) выставить уровень пороговой линии Threshold/Порог = 0.04 и установить значение More settings/удаление выбросов 10%». 5. В таблице результатов (окно «Quant. Results»/«Количественные Результаты») появятся значения Ct. 6. Значение Ct для положительного контроля (ПК) выделения ПKO Leptospira-rec не должно превышать значения порогового цикла Значение Ct для положительного контроля (К+) ОТ-ПЦР ПKO кднк Leptospira не должно превышать значения порогового цикла В отрицательном контроле (ОК) выделения ОКО не должно быть каких-либо значений Ct. 9. В отрицательном контроле (К-) ОТ-ПЦР РНК-элюент не должно быть каких-либо значений Ct. 10. Пробы, в которых появились значения Ct, не превышающие значения порогового цикла 32, считаются положительными. Если значение Ct в пробе превышает значения порогового цикла, то результат считается сомнительным, необходимо провести дополнительное исследование данного образца РНК в двух повторах. Анализ результатов амплификации BKO (канал FAM): 1. Активировать нажатием в меню кнопки «Analysis»/«Анализ», выбрать режим анализа «Quantitation»/«Количественный», активировать кнопку «Cycling A. FAM»/«Cycling A. Green», «Show»/«Показать». 2. Отменить автоматический выбор уровня пороговой линии Threshold/Порог. 3. В меню основного окна (Quantitation analysis/количественный анализ) должны быть активированы кнопки «Dynamic tube»/«динамич.фон» и «Slope Correct»/«Коррект.уклона». 4. В меню «CT Calculation»/«Вычисление CT» (в правой части окна) выставить уровень пороговой линии Threshold/Порог = 0.03 и установить значение More settings/удаление выбросов 10%». 5. В таблице результатов (окно «Quant. Results»/«Количественные Результаты») должны появиться значения Ct для ВКО STI-87-rec в каждом исследуемом образце, положительном (ПК) и отрицательном (ОК) контролях выделения. 6. В отрицательном контроле (К-) РНК-элюент и положительном контроле (К+) ПКО кднк Leptospira ОТ-ПЦР не должно быть каких-либо значений Ct. 7. В исследуемых образцах значения Ct не должны превышать значения порогового цикла 24,5 для осадков крови и СМЖ и 26,5 для гомогенатов тканей. Если значение Ct в пробе превышает значения порогового цикла, то в случае отрицательного Ct по каналу JOE в Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 16 из 24

17 этом образце, результат анализа считается невалидным, необходимо провести повторный ПЦР-анализ данного исследуемого образца, начиная с этапа выделения. Исключения составляют осадки мочи, содержащие большое количество солей, в них возможен сдвиг Ct до 27 цикла. Возможные ошибки. 1. Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля (ОК) выделения по каналу JOE и/или для отрицательного контроля (К-) ОТ-ПЦР по каналам FAM, JOE свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации. 2. Если значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля (ОК) выделения по каналу FAM и/или положительного контроля (ПК) выделения по каналам FAM, JOE отсутствуют результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов с этапа выделения. 3. Если значение Ct в таблице результатов для положительного контроля (К+) ОТ-ПЦР по каналу JOE отсутствует результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов с этапа ОТ-ПЦР. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 17 из 24

18 Приложение 2 ПРОВЕДЕНИЕ РЕАКЦИИ АМПЛИФИКАЦИИ, АНАЛИЗ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРИ ПОМОЩИ ПРИБОРА iq5 (Bio-Rad, США) Проведение реакции амплификации. 1. Включить прибор и оптический модуль за мин до проведения реакции. 2. Задать программу амплификации (Protocol) (см. табл. 2). Таблица 2 Программа амплификации кднк Leptospira Этап Температура Продолжительность Измерение Количество этапа флуоресценции циклов 1 50 С 30 мин С 15 мин С 20 c 65 С 50 c С 20 c 4 61 С 50 с FAM, HEX С 20 с 3. Задать расположение проб на платформе (Plate), выбрать флуорофоры (Select/add fluorophores), активировать флуорофоры для проб в созданном протоколе с помощью клавиши Fluorophore loading in Whole Plate mode, выбрать Sample Volume 25 мкл, Seal Type Domed Cap, Vessel Type Tubes, затем сохранить созданный протокол Save/Exit Plate Editing. 4. После этого внести реактивы для амплификации и РНК проб в пробирки и поставить их в прибор. 5. Запустить прибор (Run), выбрать Run Persistent Plate и сохранить эксперимент. АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ. Анализ результатов амплификации Leptospira (канал HEX): 1. Активировать нажатием в меню кнопки «Data Analysis». 2. Выбрать Base line в Crossing Treshold User Defined в диапазоне В норме пороговая линия должна пересекать только сигмообразные кривые накопления сигнала положительных образцов и контролей и не пересекать кривые другой формы. В случае если это не так, необходимо повысить уровень порога. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 18 из 24

19 положительные пробы фон отрицательных проб 3. Значение Ct для положительного контроля (ПК) выделения ПKO Leptospira-rec не должно превышать значения порогового цикла Значение Ct для положительного контроля (К+) ОТ-ПЦР ПKO кднк Leptospira не должно превышать значения порогового цикла В отрицательном контроле (ОК) выделения ОКО не должно быть каких-либо значений Ct. 6. В отрицательном контроле (К-) ОТ-ПЦР РНК-элюент не должно быть каких-либо значений Ct. 7. Пробы, в которых появились значения Ct, не превышающие значения порогового цикла 32, считаются положительными. Если значение Ct в пробе превышает значения порогового цикла, то результат считается сомнительным, необходимо провести дополнительное исследование данного образца РНК в двух повторах. Анализ результатов амплификации BKO (канал FAM): 1. Выбрать Base line в Crossing Treshold User Defined 25,0. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 19 из 24

20 положительные значения ВКО фон 2. В отрицательном (К-) РНК-элюент и положительном (К+) ПКО кднк Leptospira контролях ОТ-ПЦР не должно быть каких-либо значений Ct. 3. В исследуемых образцах значения Ct не должны превышать значения порогового цикла 27 для осадков крови и СМЖ и 27 для гомогенатов тканей, для осадков мочи возможно значение Ct до 29 цикла. Если значение Ct в пробе превышает это значение порогового цикла, то в случае отрицательного Ct по каналу HEX в этом образце результат анализа считается невалидным, необходимо провести повторный ПЦР-анализ данного исследуемого образца, начиная с этапа выделения. Возможные ошибки 1. Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля (ОК) выделения по каналу HEX и/или для отрицательного контроля (К-) ОТ-ПЦР по каналам FAM, HEX свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации. 2. Если значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля (ОК) выделения по каналу FAM и/или положительного контроля (ПК) выделения по каналам FAM, HEX отсутствуют результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов с этапа выделения. 3. Если значение Ct в таблице результатов для положительного контроля (К+) ОТ-ПЦР по каналу HEX отсутствует результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов с этапа ОТ-ПЦР. Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 20 из 24

21 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ Номер в каталоге Осторожно! Обратитесь к сопроводительной документации Код партии Только для исследовательских и иных немедицинских целей Дата изменения Ограничение температуры Производитель Максимальное число тестов Использовать до Обратитесь к руководству по эксплуатации Не допускать попадания солнечного света Дата изготовления Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 21 из 24

22 Редакция Место внесения изменений п. Форма выпуска п. Форма выпуска По всему тексту п. Для проведения анализа используется материал Лист вносимых изменений Суть вносимых изменений В комплекте реагентов «РИБО-сорб» реагент РНК-элюент (условия хранения: при температуре не выше минус 16 С) заменен на РНК-буфер (условия хранения: при температуре от 2 до 8 С) В комплекте реагентов «РИБО-золь-С» реагент Ацетат натрия (условия хранения: при температуре не выше минус 16 С) заменен на Раствор Е (условия хранения: при температуре от 2 до 8 С) Реагенты ОКО, ПКО Leptospira-rec и ВКО STI-550-rec перемещены из комплекта реагентов «РИБО-золь-С» в «ОТ-ПЦР-FRT» Изменено название набора реагентов на «АмплиСенс Leptospira-FL» Изменено наименование комплекта реагентов «ОТ- ПЦР-FRT» на «ПЦР-комплект» Добавлены формы комплектации Добавлен комплект реагентов «РИБО-преп» для выделения РНК Уточнено написание: ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора Добавлен материал для исследования: легкие, кровь п. Рекламации Исправлен телефон ООО «ИнтерЛабСервис» (495) Приложение 1 Добавлен прибор «Rotor-Gene» 6000 и программное обеспечение для русскоязычной версии программы Приложение 2 Добавлен прибор «iq5» («BioRad», США) В комплекте реагентов «ПЦР-комплект» изменен п. Состав объем и количество реагентов: ОТ-ПЦР-смесь-1-FRT Leptospira, ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT, Полимераза (TaqF), ТМ-Ревертаза (MMlv) Реагент DTT лиофилизированный заменен на RT-Gmix-2 По всему тексту Реагент ВКО STI-550-rec заменен на ВКО STI-87-rec По каналу JOE добавлены значения Ct для ПК и К+ и Приложение 1 для положительных проб По каналу FAM добавлено значение Ct для проб, которые считаются положительными По каналу HEX добавлены значения Ct для ПК и К+ и Приложение 2 для положительных проб По каналу FAM добавлено значение Ct для проб, которые считаются положительными Изменено время сушки сорбента после отмывки п. Проведение ПЦРанализа Уточнены объемы отбираемой верхней фазы при раствором для отмывки 4 с 5 мин на 10 мин выделении РНК п.состав Описание ОКО прозрачная бесцветная Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 22 из 24

23 Редакция Место внесения изменений п. Взятие клинического материала п. Проведение ПЦРанализа п. Проведение ПЦРанализа, пп. Б п. Выделение РНК при помощи комплекта реагентов «РИБО-преп». п. Проведение ПЦРанализа. Этап 1. Выделение РНК из проб Нижний колонтитул Суть вносимых изменений Изменено центрифугирование с 10 тыс g на 13 тыс об/мин В пробирку ПК выделения добавляется 90 мкл ОКО Уточнено время центрифугирования пробирок Изменить кол-во исследуемых суспензий, вносимое в пробирки с раствором для лизиса и ВКО STI-87-rec c 50 мкл на 30 мкл Указано соответствие каталожного номера и формы комплектации Нижний колонтитул Изменен каталожный номер п. Назначение, п. Взятие клинического материала. Транспортирование и хранение проб VV VV IvI Изменено время хранения мочи, добавлен материал для исследования, изменён порядок утилизации материала п. Проведение ПЦРанализа Уточнён порядок работы с реактивами — Исправлено название фирмы-производителя прибора — уточнения по тексту Добавлен символ, обозначающий «изделие для in vitro Титульная страница диагностики» «Кат.» и «дата изменения» заменены на Нижний колонтитул соответствующие символы Добавлен раздел «Символы, используемые в печатной продукции» По тексту Изменено название института на ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора «Вариант FRT» исправлен на «формат FRT» Форма комплектации Срок годности. Условия транспортирования и хранения Титульная страница Титульная страница Символы, используемые в печатной продукции Добавлена форма 4 комплектация наборов оптом Добавлена фраза о хранении ОТ-ПЦР-смеси-1-FRT Leptospira в защищенном от света месте Добавлено: Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное» Уточнен адрес для направления рекламаций Добавлены символ, наименование и адрес производителя Значок «Изделие для in vitro диагностики» перемещен в правый нижний угол страницы Удалена информация из нижнего колонтитула Замена значка «Изделие для in vitro диагностики» на значок «Только для исследовательских целей» Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 23 из 24

24 Редакция PM BS ChA ME Место внесения изменений Суть вносимых изменений Титульный лист Для символа добавлена надпись «Только для научно-исследовательских целей» Символы, используемые в печатной продукции Срок годности. Условия транспортирования и хранения Титульный лист Символы, используемые в печатной продукции Для символа изменена фраза с «Только для исследовательских целей» на «Только для научноисследовательских целей» Изменен адресат для направления рекламаций Для символа изменена надпись «Только для научно-исследовательских целей» на «Только для исследовательских и иных немедицинских целей» Состав Изменено количество пробирок ОКО с «1» на «2» Проведение ПЦР-анализа Изменен порядок приготовления положительного А. Выделение РНК при контроля экстракции: дополнительно добавляется помощи комплекта 90 мкл ОКО реагентов «РИБО-преп» Меры предосторожности Б. Порядок работы Обеззараживание Срок годности, условия транспортирования и хранения Раздел актуализирован по шаблону Добавлено: «Результат ПЦР-исследования считается достоверным, если получены правильные результаты для контролей этапов экстракции и амплификации ДНК» Раздел удален Добавлено: «Срок годности вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное». Изменен адрес направления рекламаций Форма 3: REF R-B49(RG,iQ) / VER / стр. 24 из 24



Источник: docplayer.ru


Добавить комментарий