Африканский вирус гепатита

Африканский вирус гепатита

Occult Hepatitis B Virus Infection in Chacma Baboons, South Africa
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3647412/

Во время предыдущих исследований восприимчивости к инфекции вируса гепатита В (HBV) ДНК HBV была обнаружена у 2/6 диких пойманных бабуинов. В настоящем исследовании ДНК HBV амплифицировали из 15/69 диких пойманных бабуинов. Все животные были отрицательными для поверхностного антигена HBV и антитела против основного антигена HBV. Текстура печени от 1 бабуина была иммуногистохимически отрицательной для поверхностного антигена HBV, но положительна для основного антигена HBV. Полный геном HBV изолята из этой печени сгруппирован с субгенотипом A2. Обратная транскрипция ПЦР печеночных РНК-амплифицированных вирусов и генов поверхностного белка, что указывает на репликацию вируса в ткани печени бабуина. Четырем экспериментальным наивным бабуинам вводили сыворотку из ДНК-положительных бабуинов HBV. Эти 4 павиана показали переходную сероконверсию, а ДНК HBV амплифицировали из сыворотки в разное время после инфицирования. Наличие ДНК HBV при относительно низких уровнях и отсутствии серологических маркеров в бабуине, нечеловеческом примате, указывает на оккультную инфекцию.

Вирус гепатита B (HBV) представляет собой частично двухцепочечный вирус размером 3,2 кб, принадлежащий к семейству Hepadnaviridae. Результат заражения этим вирусом определяется главным образом иммунным ответом хозяина и может быть острым, хроническим или оккультным. HBV разделен на 9 генотипов (A-I); был предложен дополнительный генотип J (1-3). Несколько генотипов далее делятся на субгенотипы. В странах Африки к югу от Сахары субгенотипы A1 и D3 и генотип E циркулируют (4).

Гепаднавирусы могут инфицировать птичники и млекопитающие, но имеют ограниченный диапазон хозяев, заражая только их естественные хозяева и несколько близких видов. Естественные инфекции были обнаружены у нескольких нечеловеческих приматов Старого и Нового Света, таких как шимпанзе (5), горилла (6), гиббоны (7), орангутаны (8) и шерстяные обезьяны (9). HBV, чей естественный хозяин является человеком, также заражает шимпанзе (10); Барбары макаки (11); и древесные землеройки (12), в дополнение к людям.

Бабуины (виды Papio) были предложены в качестве возможной модели вируса HBV на животных. Филогенетически бабуины близки к людям, демонстрируя гомологию ≈96% на уровне ДНК, и у них иммунная система подобна иммунной системе человека (13). Ранние исследования, связанные с инъекцией бабуинов с HBV-положительной сывороткой, не выявили каких-либо клинических или биохимических признаков инфекции у этих приматов, и первоначальные серологические исследования не смогли обнаружить поверхностный антиген HBV (HBsAg) в сыворотке, что привело к выводу, что бабуины не были восприимчивы к инфекции HBV (14). Это предполагаемое отсутствие восприимчивости бабуинов к инфекции с ВГВ и тот факт, что в отличие от шимпанзе, бабуины не являются исчезающим видом, указывают, что бабуины были хорошими кандидатами на источники печени для ксенотрансплантатов. Считалось, что использование ксенотрансплантатов от свиней и нечеловеческих приматов к людям преодолевает нехватку доноров и позволяет свести пациентов с терминальной печеночной недостаточностью до тех пор, пока не станет доступным человеческий донорский орган (15).

Чтобы подтвердить, что бабуины не были восприимчивы к инфекции HBV, Kedda et al. инъецировали 6 диких пойманных павианов Chacma (Papio ursinus orientalis) с объединенной HBV-положительной сывороткой и проанализировали бабуинов в течение 52 недель, используя чувствительные молекулярные методы для обнаружения доказательств передачи (16). ДНК HBV детектировали вложенной ПЦР в сыворотке и печени 4 бабуинов

Образцы сыворотки, полученные от 49 взрослых и 20 несовершеннолетних чакумных бабуинов, пойманных в Западном Капском, Восточном Мысе и провинциях Лимпопо в Южной Африке, хранили при -70 ° C. Ткань печени (свежезамороженная и формалин-фиксированная) была получена у 1 из взрослых банаинов-паук (далее именуемых павианом 9732), которые были подвергнуты эвтаназии по медицинским и этическим причинам. Разрешение на это исследование было получено в Комитете по этике животных Университета Витватерсранда. Все процедуры были одобрены этим Комитетом. Бабуинам была оказана помощь в соответствии с руководящими принципами Южноафриканского совета медицинских исследований.

Образцы сыворотки Baboon тестировали на HBsAg и на антитела против основного антигена HBV (анти-HBc) с использованием коммерчески доступных анализов (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA). Уровни аланина и аспартатаминотрансферазы измеряли с использованием автоматического анализатора 747 (Hitachi, Tokyo, Japan).

Фиксированная печеночная ткань из бабуина 9732 использовалась для гистологических и иммуногистологических препаратов. Ткани печени были встроены в парафин и секционированы. Секции окрашивали гематоксилином и эозином для гистологического исследования или с иммунопероксидазой и поликлональными антителами к HBsAg и основному антигену HBV (HBcAg) для обнаружения HBsAg и HBcAg в гепатоцитах.

Образцы сыворотки Baboon были промокали на нейлоновой мембране с использованием щелевого блока в соответствии с протоколом, описанным Zaaiger et al., Который имеет предел обнаружения 2,5 × 107 HBV геномов / мл (17). ДНК HBV детектировали с помощью Саузерн-блот-гибридизации с 32P-меченым ДНК-зондом HBV (ДНК HBV в векторе pBV325, подтип adr).

ДНК извлекали из 200 мкл сыворотки бабуина с использованием набора крови QIAamp DNA Blood Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. ДНК также экстрагировали из ткани печени бабуина с использованием метода экстракции фенолом-хлороформом (18). Экстрагированную ДНК определяли количественно с использованием спектрофотометрического анализа с помощью спектрофотометра NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technologies Inc., Wilmington, DE, USA).

Субгеномные вложенные ПЦР-амплификации прекора / ядра (nt 1732-2045 и nt 1765-1968), сердцевина (nt 1687-2498 и nt 2267-2436), полимераза (nt 2540-2896 и nt 2566-2858) и поверхность ( nt 255-759 и nt 459-710) были использованы для подтверждения присутствия ДНК HBV в сыворотке, используя 40 циклов (16). Чувствительность этих амплификаций составляет 40-400 HBV геномов / мл (19).

Полный вирусный геном амплифицировали с использованием 8 перекрывающихся субгеномных фрагментов (рис. 1). Условия термоциклирования и последовательности для праймеров 58, 409, 730, 1101, 1450, 1860, 2440 и 2853 были получены у Hu et al. (20). Дополнительные праймеры использовали 1575 (5′-CCGGCAGATGAGAAGGCACAGACGG-3 ‘), 1528 (5′-ACCTCTCTTTACGCGGTCTC-3′), 1552 (5’-TCTGTGCCTTCTCATCTGCC-3 ‘), 1800 (5′-AGACCAATTTATGCCTACAGCCTCCTA-3′), 1803 ( 5’-CGCAGACACCAATTTATGCCTAC-3 ‘), 1898 (5′-GGCATGGACATTGACCCGTA-3′), 1921 (5’-TTTATACGGGTCAATGTC-3 ‘), 2800 (5′-CAGGTAGCGCCTCATTTTGTGGGTCACCATATTCT-3′) и 2898 (5’-GAGGATTGGGAACAGAAAGATT- 3 ‘). Вся нуклеотидная нумерация относится к позиции с сайта EcoRI в качестве позиции 1.

Усиление генома вируса гепатита В с использованием перекрывающихся субгеномных фрагментов. Показаны 8 перекрывающихся субгеномных фрагментов, амплифицированных вложенной ПЦР. Эти фрагменты были использованы для генерации полной последовательности HBV, выделенной из ткани печени Chacma baboon 9732, Южная Африка. Пунктирные серые ящики показывают ПЦР первого круга, а белые квадраты обозначают ПЦР второго раунда. Значения вдоль двуглавой стрелки вверху находятся в базовых парах от EcoRI-сайта кругового генома HBV. Маленькие стрелки внутри ящиков указывают направление усиления.

Ампликон были секвенированы непосредственно с использованием набора реактивов BigDye Terminator версии 3.1 для циклического секвенирования (Applied Biosystems., Foster City, CA, USA) и секвенированы на генетическом анализаторе ABI3130xl с 16 капиллярами (Applied Biosystems) и теми же праймерами, которые использовались для усиление. Последовательность была внесена в GenBank под номером присоединения. JX507080. Геномную последовательность HBV, полученную от бабуина, сравнивали с соответствующими последовательностями HBV из GenBank, как описано (4).

РНК экстрагировали из различных количеств ткани печени бабуина с использованием метода (21) гуанидиниево-кислотного фенола и расщепляли без РНКазы ДНКазой I (Ферментас, Уолтем, Массачусетс, США) для удаления любой заражающей ДНК. Концентрацию РНК определяли спектрофотометрией с помощью спектрофотометра NanoDrop ND-1000. кДНК генерировали с использованием обратной транскриптазы SuperScript III (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) и олиго (dT) 18 праймеров (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Неотрицательные транскрибируемые отрицательные контрольные образцы готовили идентичным образом, за исключением того, что для каждой реакции вместо обратной транскриптазы добавляли воду, обработанную диэтилопирокарбонатом (Invitrogen). Успех реакции обратной транскрипции подтвержден ПЦР-амплификацией части гена глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (22). Также выполнялись субгеномные вложенные ПЦР-амплификации участков прекара / ядра (nt 1732-2045 и nt 1765-1968) и поверхности (nt 255-759 и nt 459-710).

ДНК извлекали из ткани печени бабуина с помощью набора QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN). ДНК-экстракты обрабатывали плазмидной безопасной АТФ-зависимой ДНКазой (Epicenter Biotechnologies, Madison, WI, USA) для селективного гидролиза линейной двухцепочечной хромосомной ДНК, оставляя цельноконтактную замкнутую кольцевую ДНК (cccDNA) HBV. CccDNA был обнаружен ПЦР (23) в реальном времени с помощью Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems).

Передача HBV экспериментально наивным бабуинам проводилась в Национальном институте здравоохранения (Bethesda, MD, USA). Животных размещали и поддерживали в Bioqual, Inc. (Rockville, MD, USA). Жилье и уход за животными соответствовали всем соответствующим руководящим принципам и требованиям, а животные размещались на объектах, которые полностью аккредитованы Ассоциацией по оценке и аккредитации лаборатории Animal Care International. Все протоколы были рассмотрены и одобрены Институциональными комитетами по уходу и использованию животных Национального института аллергии и инфекционных заболеваний Национальных институтов здравоохранения и Биокуляра, Inc. Экспериментально наивные, бабуины, выращиваемые внутри страны, были получены у местного заводчика (Mannheimer Foundation, Homestead, FL, США). Перед включением животных в исследование сыворотка была свободна от всех маркеров репликации HBV при тестировании серологически и вложенной ПЦР, как описано выше.

Четырех экспериментально наивных бабуинов каждый инокулировали 500 мкл сыворотки, полученной из ДНК-положительных ловушек с ДНК-положительных HBV из Южной Африки. Каждому бабуину вводили сыворотку от одного пойманного бабуина. После инъекции сыворотка была получена от каждого из 4 недавно введенных бабуинов с недельными интервалами. Сыворотку использовали для измерения уровней аланинаминотрансферазы, изоцитратдегидрогеназы, γ-глутамилтранспептидазы, HBsAg, антигена HBV e, антител против антигена HBV e, антител против HBsAg и анти-HBc.

ДНК, экстрагированную из образцов сыворотки, использовали для вложенной ПЦР-амплификации области поверхностного гена (nt 459-710). Через 25 недель после инъекции исследование было прекращено, и бабуины были подвергнуты эвтаназии. При вскрытии ткани печени и сыворотки получали от каждого бабуина для дальнейшего тестирования, чтобы подтвердить, что вирус, извлеченный из экспериментально наивных бабуинов, был таким же, как и у оригинальных бабуинов.

Распространенность HBV у популяции бабуина (P. ursinus orientalis) в Южной Африке определялась путем извлечения ДНК из сыворотки из 69 диких пойманных бабуинов и амплификации 4 областей вирусного генома (прекурсор / сердцевина, сердцевина, полимераза и поверхность регионов) путем вложенной ПЦР. ДНК HBV не может быть амплифицирована с помощью однократной ПЦР, что указывает на то, что ДНК HBV присутствует на низких уровнях в сыворотке бабуина.

Используя критерий> 3 из 4 областей, являющихся ПЦР-положительными, мы обнаружили, что 11 (22,4%) из 49 взрослых и 4 (20,0%) из 20 несовершеннолетних диких пойманных павианов были положительными для HBV. Общая распространенность гепаднавирусной ДНК у бабуинов составила 21,7% (15/69). Кроме того, присутствие и специфичность ДНК HBV подтверждали, когда они были обнаружены непосредственно в сыворотке 5 из 69 бабуинов с использованием Саузерн-блот-анализа. Только 5 из 15 ПЦР-положительных образцов сыворотки были положительными по гибридизации по Саузерну из-за относительно низкой чувствительности этого метода.

Образцы сыворотки из 4 из 15 положительных бабуинов на основе HBV, для которых была доступна дополнительная сыворотка, были протестированы и оказались отрицательными для HBsAg и анти-HBc. Уровни аланина и аспартатаминотрансферазы находились в пределах контрольных диапазонов, а после высокоскоростного центрифугирования и лечения антителом против HBsAg в сыворотке не наблюдались вирусные частицы с помощью электронной микроскопии. Гистологическое исследование ткани печени у 1 из этих бабуинов (9732) показало легкое очаговое долевое гепатит, но не было обнаружено признаков межпанельного гепатита, мостикового некроза, дисплазии гепатоцитов, цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы (рис. 2, панель А). Иммуногистохимическое окрашивание ткани печени показало HBcAg в ядрах некоторых гепатоцитов с пятнистым распределением (рис. 2, панель B). HBsAg и 42 нм окутанные (датчанные) частицы не были обнаружены в цитоплазме.

Печеночная ткань от чаба-павиана 9732, Южная Африка, показывающая лобулярный гепатит. Ткани печени получали при вскрытии, фиксировали в формалине, вставляли в парафин и разделяли. A) Окрашивание гематоксилином и эозином, показывающее очаг легкого долькового гепатита, но не свидетельствует о наличии признаков гепатита или мокрого некроза. Портальные тракторы в норме. B) Иммунопероксидазу окрашивают поликлональным антителом против основного антигена гепатита В. Ядро антигена было обнаружено в случайном гепатоцитарном ядре. Стрелки указывают выбранные положительные ядра. Оригинальные увеличения × 400.

Низкие вирусные нагрузки показали, что полный геном ВГВ можно амплифицировать только субгеномным образом и из-за небольших объемов доступной сыворотки, ткань печени, полученная от бабуина 9732, использовалась для дальнейшей характеристики HBV у бабуинов. Полный геном HBV амплифицировали с помощью вложенной ПЦР из 8 перекрывающихся субгеномных фрагментов (рисунок 1).

Филогенетические анализы полного генома показали, что HBV от бабуина был тесно связан с субгенотипом A2 HBV (рисунок 3). Это открытие было подтверждено сравнением расчетов дивергенции средних ± SD нуклеотидов по сравнению с субгенотипом A2 (1,00 ± 0,55) и субгенотипом A1 (4,52 ± 0,42). Аналогичные результаты были получены для каждой из 4 открытых рамок считывания. Папилломавирус HBV имел мутации в основном промоторе ядра и областях прекурсоров, не обнаруженных в субгенотипе A2. Эти мутации включали двойную мутацию G1809T / C1812T в последовательности Kozak, предшествующую стартовому кодону предшественника белка и G1888A в области прекора. Мутации G1809T / C1812T характерны для субгенотипа A1, а G1888A уникален для субгенотипа A1 (4,24). Перевод 4 открытых рамок считывания показал, что они хорошо сохраняются относительно консенсусной последовательности субгенотипа А2 со следующими исключениями: T380C приводит к образованию rtV84A в консервативной области A полимеразы и C76R в HBsAg; A2019G, приводящий к E40G в основном белке; и C1470T, что приводит к образованию P33G в белке X и T1765C, что приводит к Р145S в Х-белке.

Дендограмма полного генома вируса гепатита В (HBV), выделенного из чакмы-бабуина 9732, Южная Африка. Образцы, представляющие все 8 генотипов HBV и гепаднавирусы приматов, включены. Образцы нумеруются в соответствии с их номерами доступа GenBank, за которыми следует их страна происхождения. Образец из панелей бабуина 9732 (жирный шрифт) сильно связан с изолятами субгенотипа А2 (значение начальной загрузки 100). Письма справа указывают на генотипы. Значения вдоль ветвей являются значениями начальной загрузки. Шкала шкалы указывает на нуклеотидные замены на сайт.

РНК, экстрагированная из ткани печени бабуина 9732, была обратной транскрибирована и амплифицирована в раковинах предварительного образца / сердцевины (nt 1765-1968) и открытой (nt 459-710) рамах (рис. 4). Последовательности этих ампликонов были идентичны последовательностям ДНК, выделенной из печени бабуина 9732.

Вложенная ПЦР-амплификация субгеномной области кДНК для вируса гепатита B бабуина, Южная Африка. Обратные транскрибируемые, кДНК-препараты, обработанные ДНКазой I, амплифицировали с помощью ПЦР и ампликоны разрешали электрофорезом на 1% агарозном геле, содержащем бромид этидия. В качестве отрицательных контролей включали образцы без обратной транскрипции (в которых вместо фермента во время обратной транскрипции добавляли воду, содержащую диэтилпирокарбонат [DEPC]). Верхняя панель: Вложенная ПЦР 1: 255F-759R; ПЦР 2: 459F-710R. Нижняя панель, область 550 г общей глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы амплифицирована для оценки качества мРНК. Дорожки 1 и 8, 100 мг ткани печени бабуина, используемые для экстракции РНК; полосы 2 и 9, отрицательный контроль экстракции РНК; полосы 3 и 10, 200 мг ткани печени бабуина, используемые для экстракции РНК; полосы 4 и 11, отрицательный контроль экстракции РНК; полоса 5, отрицательный контроль обработки ДНКазы I, в котором вместо РНК добавляли воду, обработанную DEPC; полоса 6, отрицательный контроль обратной транскрипции, в котором вместо DKC была добавлена ​​вода, обработанная DEPC; полосы 7 и 12, двойной круглый вложенный отрицательный контроль ПЦР, содержащий воду лучшего качества вместо кДНК; полоса 13, однократный отрицательный контроль ПЦР, содержащий воду лучшего качества вместо кДНК; полоса 14, ПЦР-позитивный контроль, содержащий ДНК, экстрагированную из ткани печени бабуина 9732 в качестве матрицы.

cccDNA была обнаружена в ткани печени бабуина 9732 с использованием ПЦР в реальном времени. В качестве положительного контроля использовали ДНК из ДНК-положительной опухоли HVV и непухотной печени человека и плазмидной ДНК, содержащей геном ВГВ большей длины, и в качестве отрицательного контроля использовали ДНК из ткани печени крысы. HBV cccDNA-положительные контрольные образцы имели температуры плавления 82,7 ° C-84,0 ° C, а отрицательные контрольные образцы имели температуры плавления

Каждому из 4 экспериментально наивных, базирующихся на внутреннем уровне бабуинов вводили сыворотку из 1 из 4 диких пойманных HBV ДНК-положительных бабуинов. Образцы сыворотки от экспериментально наивных бабуинов были отрицательными ДНК HBV перед инъекцией, а также были определены базовые уровни аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы и IgG. Пабуины были временно положительными для нескольких из этих маркеров и были периодически позитивными для ДНК HBV в сыворотке. Результаты для типичного образца (бабуин 2), инфицированного сывороткой из бабуина 9732, показаны на рисунке 5. ДНК, экстрагированная из ткани печени, полученная при вскрытии из бабуина 2, была использована для амплификации и последовательности части поверхностного гена (nt 409-1101) , Последовательность вируса, выделенного из ткани печени бабуина 2 через шесть месяцев после инъекции, была идентична последовательности HBV этого региона, найденной в оригинальном бабуине 9732.

Уровни серологических маркеров аланинаминотрансферазы (ALT) и гепатита B (HBV) и обнаружение ДНК HBV у бабуина 2. Сыворотка, полученная из бабуина 2 (которая была введена сывороткой из бабуина 9732), а также уровни серологических маркеров ALT и HBV через недельные интервалы после инъекции. Сыворотка для уровней недели 0 была получена непосредственно перед инъекцией. OD: CO обозначает оптическую плотность: отношение коэффициента отсечки. OD: CO> 1 указывает на положительный результат. ДНК HBV детектировали с помощью вложенной ПЦР-амплификации (255-761 в первом раунде и 459-710 во втором круге) области 252-bp гена вирусной поверхности с использованием ДНК, экстрагированной из сыворотки, полученной от инфицированного бабуина с недельными интервалами , HBsAg, поверхностный антиген HBV; Анти-HB, антитело против поверхностного антигена HBV; Анти-HBc, антитело против основного антигена HBV; HBeAg, антиген HBV; Анти-HBe, антитело против антигена HBV. + указывает, что образец успешно амплифицировался в этот момент времени, и — указывает на отсутствие амплификации вирусной ДНК. 26-я неделя указывает на результат амплификации с использованием ДНК, экстрагированной из сыворотки при вскрытии, а конечная точка времени указывает на успешную амплификацию вирусного продукта из ДНК, извлеченной из ткани печени, полученной из бабуина 2 при вскрытии.

Обнаружение ДНК HBV в образцах сыворотки 2 бабуинов Чакмы перед инъекцией HBV человека (16) предполагало, что бабуины могут быть хронически инфицированы HBV. Наша цель состояла в том, чтобы определить распространенность HBV у диких пойманных павианов Chacma и охарактеризовать вирус, выделенный из этих животных. Общая распространенность (21,7%) HBV у бабуинов сходна с распространенностью HBV у других нечеловеческих приматов в районах, где HBV является очень эндемическим, включая Африку к югу от Сахары (25).

Бабуины были серологически отрицательными, а 1 бабуин, изученный гистологически, имел слабый очаговый лобулярный гепатит, и HBcAg был обнаружен в ткани печени путем иммуногистохимического окрашивания. Обнаружение низких уровней ДНК HBV в ткани печени бабуина и в сыворотке в отсутствие HBsAg и при относительно низких уровнях ДНК HBV классифицирует эту инфекцию как оккультную (26). Отсутствие каких-либо серологических маркеров инфекции HBV дополнительно отличает эту инфекцию как серонегативную оккультную HBV-инфекцию (26). Это открытие аналогично вторичной оккультной инфекции в лесу (27). Кроме того, ДНК HBV была обнаружена у несовершеннолетних и взрослых бабуинов, что свидетельствует о непрерывной сохранности вируса, которая была успешно передана экспериментально наивным бабуинам. Обнаружение только ДНК HBV не обязательно соответствует инфекции HBV (28). Таким образом, обнаружение cccDNA и вирусной РНК в ткани печени бабуина 9732 показало, что HBV реплицируется. Низкие уровни вирусных нуклеиновых кислот, обнаруженные в печени бабуина, являются еще одной характеристикой оккультных инфекций (27). Это исследование демонстрирует естественную оккультную инфекцию HBV у нечеловеческого примата.

Филогенетический анализ генома HBV бабуина показал, что он принадлежит генотипу A, кластеризующемуся с субгенотипом A2. Это открытие является неожиданным результатом, поскольку субгенотип A1 преобладает в Южной Африке (24). Однако в области базального основного промотора / прекора бабуин HBV имел различные характеристики субгенотипа A1. Четыре дополнительных мутации в областях полимеразы, поверхности, X и ядра штамма HBV бабуина дифференцировали изолят бабуина от большинства субгенотипов A2. Эти мутации, как известно, не вызывают каких-либо серьезных функциональных или конформационных изменений.

Парадоксальная идентификация субгенотипа А2 у бабуина, когда субгенотип А1 преобладает в Африке, может указывать на то, что субгенотип А2 является более старым штаммом, который ранее был распространен в Африке, который был заменен другими штаммами, включая субгенотип А1 и генотипы D и Е (29). Аналогичная тенденция могла бы произойти в Средиземноморском регионе, где генотип D теперь преобладает над генотипом A (30). Аналогичным образом, было установлено, что изменение распространенного генотипа HBV в центральной и западной Африке произошло за последние 200 лет, а генотип E, первоначально ограниченный западным побережьем Африки, теперь распространяется на большой полумесяц, простирающийся от Гамбии, через Нигерию и Демократическую Республику Конго в Намибию и Мозамбик (31). Существует нехватка данных секвенирования для субгенотипа A2 из Африки. В GenBank было депонировано только 4 полных генотипа генома А2 из Южной Африки. Были также депонированы более короткие субгеномные последовательности субгенотипа А2 из Южной Африки (32), Туниса (33) и Кении (34). Более обширные молекулярные эпидемиологические исследования в Африке могут выявить более высокую циркуляцию субгенотипа А2 в более отдаленных регионах.

Другим объяснением парадоксального обнаружения субгенотипа А2 у бабуина может быть то, что в Африке, как показано в Индии, изоляты субгенотита А2 ограничены лейкоцитами периферической крови (ПБЛ). В Индии субгенотип A1 и генотип D циркулируют, но активно реплицируются изоляты субгенного типа A2 HBV, обнаруженные в PBL (35). Эти субгенетические изоляты A2 были ограничены PBL и не были обнаружены в сыворотке. Предполагается, что дифференциальное иммунное давление разделяет HBV на разные части тела, в котором разные штаммы развиваются независимо (35). Дальнейшее исследование будет необходимо для определения того, является ли субгенотип А2 разделенным на ПБЛ в Африке.

В странах Африки к югу от Сахары большинство носителей HBV человека отрицательны для антигена HBV e, и у этих лиц распространение HBV в основном горизонтальное (36). В бабуинах их естественные привычки указывают на то, что передача вируса HBV с павианом-бабуином является весьма вероятной. Бабуины — это социальные животные, а узы укрепляются ежедневным уходом с несколькими родственными и несвязанными партнерами, включая потомство (37). Молодые бабуины, как и их человеческие коллеги, проводят большую часть дня, играя вместе. Игры могут стать вполне физическими, часто приводящими к ложным боям. Физические бои среди мужских и женских взрослых бабуинов встречаются редко. Альфа-мужчины склонны быть агрессивными, а проявления доминирования и преследований происходят ежедневно.

Хорошо документированные взаимодействия между людьми и бабуинами делают перекрестную передачу этого вируса чрезвычайно правдоподобной (37). Бабуины являются наиболее широко распространенными нечеловеческими приматами в Африке и встречаются практически во всех частях Африки к югу от Сахары. Они часто появляются в древнегипетской мифологии и искусстве, изображаемых как пленники, привезенные из Южной Африки или как домашние животные на поводках (37). В южной части Африки бабуины содержались в качестве домашних животных и обучались работать водителями оскарщиц, железнодорожниками и козлами на фермах (37). Однако чаще встречаются сообщения о конфликте между людьми и бабуинами. В сельской местности бабуины набрасывают сады, разрушают оросительные трубы и убивают овец и коз. Поскольку бабуины могут стать агрессивными, когда их оспаривают, их часто убивают фермеры за вредителей. Убой бабуинов для кустарника может стать еще одним источником воздействия вируса (38).

Из результатов настоящего исследования невозможно определить, были ли бабуины инфицированы HBV людьми, как это было высказано (39), или были ли люди инфицированы бабуинами. Однако, как заметил Майкл Лай, эксперт по вирусам: «Когда мы подвергаемся экзотическим животным, всегда есть риск оказаться под неизвестным … Когда мы нарушаем существующий мир между людьми и природой, мы открываем пандоры который может содержать сюрпризы »(40).

Предлагаемая цитата для этой статьи: Dickens C, Kew MC, Purcell RH, Kramvis A. Оккультная инфекция вируса гепатита B в бакуанах Chacma, Южная Африка. Emerg Infect Dis [Интернет]. 2013 апр [дата указана]. http://dx.doi.org/10.3201/eid1904.121107

Мы благодарим C. Brechot за предоставление ДНК-зонда HBV и Allan Paterson за проведение серологического и иммуногистохимического анализа.

M.C.K. был поддержан грантом (NRF2K421) от Национального исследовательского фонда, Южная Африка. А.К. был поддержан грантом (00/52) от Фонда исследований полиомиелита, Южная Африка. CD. была поддержана стипендиями из Национального исследовательского фонда и Фонда исследований полиомиелита. R.H.P. была поддержана Программой внутрипрофильных исследований Национального института аллергии и инфекционных болезней, Национальными институтами здравоохранения.

Доктор Диккенс является исследователем в Отделе внутренней медицины Университета Витватерсранда, Йоханнесбург, Южная Африка. Ее основные научные интересы включают молекулярную вирусологию и рак.



Источник: rupubmed.com


Добавить комментарий